Кровь человека – уникальная жидкость. Ее удивительный состав и свойства остаются предметом для внимательного изучения ученых и медиков. Определение группы крови цоликлонами – один из новых способов. В чем заключается данная методика? Возможно ли определение резус-фактора цоликлонами? Что это за сыворотка? Как быстро можно получить ответ после лабораторного исследования?
Что такое цоликлоны
Для определения группы крови и установления резус-фактора в лабораториях используется несколько методов, и анализ с применением цоликлонов используется чаще всего. Эти антитела моноклинального типа, разработанные инженерами-генетиками, имеют повышенную активность и обеспечивают ускоренную реакцию агглютинации. Справочно. Агглютинация – склеивание и выпадение в осадок. Принцип действия заключается в соединении с агглютиногенами – химическими компонентами, находящимися на верхнем слое определенных эритроцитов. В зависимости от реакции становится возможным определение группы крови цоликлонами. О наличии в составе агглютиногена А говорит реагент анти-А, соответственно, агглютиноген B выявляют с помощью вещества анти-B.
Отметим, что цоликлоны являются достаточно универсальным инструментом. Они позволяют определять группу крови как в системе AB0 (с использованием реагентов анти-А (красная жидкость) и анти-B (синяя жидкость)), так и в системе резус (с использованием реагента анти-D (прозрачная жидкость)).
Справочно. Для исследования используется нативная (живая) кровь в консерванте или без него, взятая из пальца.
Для чего проводится анализ
Группа и резус-фактор – генетически обусловленные характеристики крови, которые наследуются от родителей и остаются неизменными на протяжении всей жизни человека. Классификация групп крови осуществляется, исходя из определенного набора биохимических параметров и состава антигенов, и насчитывает 4 основных группы. Переливание пациенту крови несовместимой группы или с другим резус-фактором несет с собой смертельную опасность – иммунная система начинает вырабатывать антитела против чужеродных клеток, которые атакуют и разрушают их. Именно по этой причине в ситуациях, которые несут с собой риск обширной кровопотери, необходимо точное определение принадлежности крови и резус-фактора как у донора, так и у реципиента.
Определение группы крови цоликлонами
Чтобы узнать ГК, используя цоликлоны, необходимо взять изделие с плоской поверхностью (планшет), сами реагенты и две капли крови. Для анализа подходит практически любая жидкость независимо от состояния (законсервированная или без консерванта) и способа забора (из вены/пальца). Перед нанесением на поверхности планшета делаются пометки, показывающие, где будет использоваться тот или иной цоликлон.
После подготовки поверхности лаборант наносит на нее по крупной капле реагента: обычно анти-А располагают слева, а анти-B – справа. Затем к веществу добавляют по кровяной капле, ее размер должен быть десятикратно меньше объема нанесенной жидкости.
Планшет требуется осторожно раскачивать из стороны в сторону, чтобы цоликлоны и кровь перемешались, но капли с разными реагентами не слились друг с другом. Спустя несколько минут можно наблюдать полное соединение жидкостей либо реакцию агглютинации, когда эритроциты склеиваются, а и наступает свертывание.
Основные параметры и характеристики
Основные параметры и характеристики изделий должны соответствовать требованиям, указанным в таблице 1.
Таблица 1
| Характеристики | Варианты исполнения | |||||
| 5 лунок белый | 5 лунок прозрачный | 30 лунок белый | 30 лунок прозрачный | 100 лунок белый | 100 лунок прозрачный | |
| Диаметр лунки, по длинной оси (мм) | 23 | 23 | 23 | 23 | 23 | 23 |
| Диаметр лунки, по короткой оси (мм) | 15 | 15 | 15 | 15 | 15 | 15 |
| Размер (мм) | 86х121 | 86х121 | 133х167 | 133х167 | 250х250 | 250х250 |
| Расположение лунок | 1 ряд 5 лунок | 1 ряд 5 лунок | 5 рядов по 6 лунок | 5 рядов по 6 лунок | 10 рядов по 10 лунок | 10 рядов по 10 лунок |
| Масса (грамм) | 7,65 | 7,65 | 16,21 | 16,21 | 45,35 | 45,35 |
Примечание: допустимые отклонения ± 5 %.
Лунки эллипсовидной формы выполнены в виде полусфер и имеют бортики, препятствующие растеканию реагентов.
Вдоль сторон планшетов имеется рельефно проработанная прямоугольная рамка; ряды с лунками разделены между собой рельефными канавками.
Изделия не должны иметь острых, режущих кромок.
Не допускаются царапины, следы от выталкивателей глубиной более 0,3 мм, сколы.
Варианты исполнения планшета на 5 лунок белый и 5 лунок прозрачный могут выпускаться с дополнительной наклейкой для регистрации персональных данных обследуемого лица и результатов анализа по типированию его крови. Этикетка из бумаги этикеточной по ГОСТ 7625-86 Е должна содержать следующую информацию:
- сокращенное название реагентов к антигенам эритроцитов человека анти-А, анти-В, анти-АВ, анти-D и обозначение (К) для контрольной пятой лунки, расположенных строго напротив соответствующей лунки;
- ФИО обследуемого лица;
- № истории болезни, медицинской карты и т.п.;
- домашний адрес обследуемого лица;
- результата анализа;
- подписи врача.
Планшет представляет собой прозрачную или белого цвета прямоугольную пластину из полимерного материала с эллипсовидными лунками. Лунки планшета выполнены в виде полусфер. Это способствует увеличению скорости реакции и формированию агглютинатов в случае положительной реакции в центральной части лунки. Специально разработанная форма лунок позволяет также избежать так называемого «краевого эффекта» реакции, то есть рассредоточения компонентов реакции по краю лунок, что в свою очередь затрудняет правильный учет результатов исследований.
Форма и диаметры лунок подобраны таким образом, чтобы минимизировать эффект «подсыхания поля реакции». Это позволяет избежать неспецифических реакций, проявление которых возможно при использовании планшетов с плоскодонными лунками.
Рассчитанный при проектировании объем лунки оптимально соответствует объемам реагента и исследуемой крови, которые должны быть использованы при проведении анализа.
Определение резус-фактора
Цоликлоны позволяют определить и резус-фактор, анализ проводится следующим образом:
- На поверхность планшета наносится приблизительно 0,1 мл реагента.
- Рядом капают 0,01 исследуемой крови.
- Цоликлон и изучаемую жидкость смешивают специальной стеклянной палочкой, каждые полминуты планшет необходимо покачивать.
Важно! Возникновение агглютинации отмечается спустя 15 секунд после перемешивания, ярко заметный эффект наступает через 60 секунд, однако результат, который допустимо считать достоверным, наблюдается только через 3 минуты. В течение всего времени планшет нужно покачивать.
При склеивании и выпадении осадка из эритроцитов кровь считается резус-положительной, а при отсутствии агглютинации резус-фактор получает отрицательную отметку. Увидеть результат при появлении хлопьев эритроцитов можно без использования специального лабораторного оборудования.
Интерпретация результатов
Интерпретация результатов процедуры проводится визуально – жидкости либо полностью соединяются, либо наступает склеивание (агглютинация) кровяных телец, вследствие чего биоматериал сворачивается и в нем образовываются мелкие хлопья.
Интерпретация результатов
Расшифровка осуществляется следующим образом:
- если реакция отсутствует во всех образцах биоматериала, его можно причислить к I группе (это означает, что агглютиноген в клетках крови отсутствует);
- вступление кровяных клеток в реакцию с цоликлоном анти-А свидетельствует о том, что кровь исследуемого человека относится к II группе;
- склеивание эритроцитов с цоликлоном анти-В – признак III группы крови;
- если биоматериал вступил в реакцию со всеми веществами, то он принадлежит к IV группе.
Исследуемая кровь группы О(I)
Для проверки точностии результатов и определения резус-фактора к образцам биоматериала добавляют цоликлон АВ – если произошла реакция агглютинации, он в крови определяется как положительный (отсутствие склеивания эритроцитов говорит об отрицательном резус-факторе). Чтобы исключить заболевания, при которых агглютинация происходит при контакте с любыми раздражителями, капля крови пациента смешивается с физраствором. В случаях, когда визуально определить результат невозможно, анализ переделывают, а образцы рассматривают под микроскопом.Таблица. Реакции разных групп крови с цоликлоном анти-А и анти-В.
| Группа крови | Реакция с цоликлоном анти-А | Реакция с цоликлоном анти-В |
| I группа | Отсутствует | Отсутствует |
| II группа | Положительная | Отсутствует |
| III группа | Отсутствует | Положительная |
| IV группа | Положительная | Положительная |
Нюансы процедуры
Точность исследования ГК и резус-фактора с помощью цоликлонов очень высока, однако порой анализ выдает неправильные результаты.
Причиной является фактор человеческой ошибки, когда процедуру проводят с нарушениями.
Чтобы снизить риск такой ошибки, нужно помнить о следующих аспектах:
- Цоликлоны хранятся в холодильнике, оптимальный температурный режим – +2… +8 градусов по Цельсию. Если флакон распечатан, его содержимое нужно использовать в течение 30 дней, крышка должна быть плотно завинчена. Реагенты очень чувствительны к внешним воздействиям и при несоблюдении правил хранения или по истечении срока теряют свои качества, что приводит к ошибкам.
- Исследование проводится при ярком освещении, оптимальный режим в лаборатории – +15… +25 градусов по Цельсию. Если климатические условия не дают возможности соблюсти нужную температуру воздуха, поверхность планшета перед процедурой охлаждают.
- Важно не спутать, какие цоликлоны где находятся на планшете, для этой цели их местоположение обозначается на поверхности маркером. Хотя реагенты анти-А и анти-B имеют цветовое различие, после добавления крови оно практически исчезает.
- Следует соблюдать пропорции жидкостей: если эритроцитов будет слишком много, реакцию агглютинации будет сложнее отследить, в противоположном случае (слишком малый объем) склеивание происходит в замедлении.
- Нельзя допустить, чтобы две капли соединились: даже касание краями приводит к искажению результатов анализа. Если жидкости все же слились, исследование с помощью цоликлонов проводят сначала.
- При смешении при помощи лабораторной стеклянной палочки необходимо брать отдельный предмет для каждой изучаемой капли.
- Минимальная продолжительность наблюдения – 3 минуты, при неоднозначных результатах исследование длится до 5 минут.
Загрузка...
